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应用方向——***方面：近年来干l细胞的研究越来越被人们关注，由于它是一种具有自我复l制能力的多潜能细胞，在一定条件下，可分化为多种功能细胞。根据发育阶段和取材来源，干l细胞分为胚胎干l细胞和成体干l细胞两大类。骨l髓和脐血是成体干l细胞的主要来源。骨l髓干l细胞在骨l髓中含量很少，约占骨l髓有核细胞的十万分之一，所以要在临床上广泛应用首先必须具备***的冻存与复苏技术。而干l细胞研究的深入将解决包括***l症等一系列为人们所知的“绝l症”。而“冬眠”技术对***的发展有着里程碑式的意义。

主要技术——冻存技术：1.液氮法：目前，细胞冻存尤为常用的技术是液氮冷冻保存法，主要采用加适量保护剂的缓慢冷冻法冻存细胞。细胞冷冻技术的关键是尽可能地减少细胞内水分，减少细胞内冰晶的形成。采用甘油或二甲l基亚砜作保护剂，这两种物质分子量小，溶解度大，易穿透细胞，可以使冰点下降，提高细胞膜对水的通透性，且对细胞无明显毒性。

2)离心洗涤:向培养瓶内加5~10m1预冷的MEM使细胞悬浮，再将其吸出置灭菌离心管中，以1000rpm 离心8~10分钟后弃去上清液。

3)细胞悬液的制备:向离心管内逐滴缓慢加入预冷的冻存保护液，使细胞浓度为150~400万/ml，然后迅速分装于安瓿瓶中，每瓶加量为1ml。

4)致冷冻:将安瓿瓶放入带有棉垫的纸盒或塑料盒内，直立置不同条件下致冷冻保存:a. 4℃两小时后移至-20℃作用2小时，再移入-40℃4小时后在-70℃下24小时投入液氮。b. -20℃4小时后移至-40℃，经4小时移人-70℃冰箱24小时，投入液氮。c. -40℃4小时后移入-70℃24小时后投入液氮。d. -20℃4小时后移入-70℃经24小时后投入液氮中。

冻存和复苏的原则：慢冻快融。当细胞冷到零度以下，可以产生以下变化:细胞器脱水，细胞中可溶性物质浓度升高，并在细胞内形成冰晶。如果缓慢冷冻，可使细胞逐步脱水，细胞内不致产生大的冰晶;相反，结晶就大，大结晶会造成细胞膜、纲胞器的损伤和破l裂。复苏过程应快融，目的是防止小冰晶形成大冰晶，即冰晶的重结晶。慢冻程序标准程序:当温度在-25℃以上时，1~2℃/min当温度达-25 ℃以下时，5~10℃/min当温度达-100℃时，可迅速放入液氮中细胞冻存器简易程序：将冷冻管(管口要朝上)放入纱布袋内，纱布袋系以线绳，通过线绳将纱布袋固定于液氮罐罐口，按每分钟温度下降1~2℃的速度，在40min内降至液氮表面，停30min后，直接投人液氮中。