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陶沙 女士
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发布时间:2020-07-23 20:50:41
操作步骤:1.直接刮取平皿上生长的新鲜培养物置入菌保存管中。2.一般一个平皿的纯培养物可保存两个菌保存管。3.使用时用接种针从菌保存管中取出一个小瓷珠直接划线平板或置入相应增菌液中。应用:菌保存管可保存一般***、苛刻菌,霉菌、酵母菌等***也可在低温条件下通过菌保存管保存,因此菌保存管被广泛应用于临床领域(临床药敏试验菌株的保存)、疾控领域(监测分离到的菌株的保存)、菌保存中心(菌株的日常取用与保存)以及制药企业(阳性对照菌株保存和取用)等领域。
(一)细胞冻存:1.配制含10%DMSO、20%胎牛xue清的冻存培养液,DMSO不用过滤去菌。2.取对数生长期的细胞,用胰蛋白酶把单层生长的细胞消化下来,悬浮生长的细胞则直接将细胞移至15mL 离心管中,1500rpm, 5min。3.去除胰蛋白酶及旧的培养液,加入适量配制好的冻存培养液,用吸管轻轻吹打使细胞均匀,计数,调节冻存液中细胞的终密度为5x10%/mL~ 1x107/mL。4.将细胞分装入冻存管中,每管1mL。5.在冻存管上标明细胞的名称,冻存时间及操作者。6.冻存,将装有细胞的冻存管4℃冰箱30min, 放入-20℃冰箱2h,然后放入-70℃冰箱中过夜,取出冻存管,移入液氮容器内。
慢速冷冻方法又可使细胞内的水分渗出细胞外,减少胞内形成冰结晶的机会,从而减少冰晶对细胞的损伤常用的细胞冷冻贮存器为液氮贮存器,规格有35L3和50L3两种。细胞冻存时常备的材料有: 0.25%胰蛋白酶,含10%~20%的血l清培养液,DMSO (分析纯)或无色新鲜甘油(121℃蒸气高压消毒),2ml安瓿(或专用细胞冻存管)、吸管、离心管、喷灯、纱布袋(或冻存管架)等。
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