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陶沙 女士
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发布时间:2020-07-04 04:00:42
注意事项:从原理上讲,所有菌都可用瓷珠菌保存管保存。菌保存的原理是DNA-copy时自发突变导致菌退化,因此要创造代谢不活泼的状态,干燥、低温、缺氧、缺营养的环境,创造的环境越接近此状态,所保存的菌的时间就越长。但需要注意的是,由于苛刻菌(如流行感嗜血杆l菌、脑l膜炎萘瑟氏菌)等特殊***保存时,需-80℃或更低温度保存,才可以做到更长期的保存。
慢速冷冻方法又可使细胞内的水分渗出细胞外,减少胞内形成冰结晶的机会,从而减少冰晶对细胞的损伤常用的细胞冷冻贮存器为液氮贮存器,规格有35L3和50L3两种。细胞冻存时常备的材料有: 0.25%胰蛋白酶,含10%~20%的血l清培养液,DMSO (分析纯)或无色新鲜甘油(121℃蒸气高压消毒),2ml安瓿(或专用细胞冻存管)、吸管、离心管、喷灯、纱布袋(或冻存管架)等。
低温保护剂的应用:在细胞冻存时加入温保护剂,能大大提高冻存效果。常用的低温保护剂是DMSO,它是一种渗透性保护剂,可迅速透入细胞,提高胞膜对水的通透性,降低冰点,延缓过程,能使细胞内水分在冻l结前透出细胞外,在胞外形成冰晶,减少胞内冰晶,从而减少冰晶对细胞的损伤。细胞冻存方法:预先配制冻存液:含 20%血l清培养基;10% DMSO;取对数生长期细胞,经胰酶消化后,加入适量冻存液,用吸管吹打制成细胞悬液(1~5X10细胞/ml);加入1ml细胞于冻存管中,密封后标记冷冻细胞名称和冷冻日期。细胞复苏方法:(1) 从液氮中取出冷冻管,迅速投入37~38 C水浴中,使其融化(1 min左右)。(2) 5 min内用培养液稀释至原体积的10倍以上。(3)低速离心10 min。(4)去上清,加新鲜培养液培养刚复苏的细胞。
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